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细胞培养之细胞华体会体育最新地址的筛选

细胞华体会体育最新地址是细胞生长的环境和营养来源，其性能很大程度上决定了细胞生长密度和表达蛋白的产量和质量，因此细胞华体会体育最新地址是生物制药工艺开发最重要的环节之一。细胞华体会体育最新地址是供给细胞营养、维持细胞生长和增殖的多种营养物质的混合物，种类一般包括经典/基础华体会体育最新地址、无血清华体会体育最新地址以及化学成分确定的华体会体育最新地址等。

一．细胞华体会体育最新地址分类：

1、天然华体会体育最新地址：天然华体会体育最新地址是直接取自于动物组织的提取液或体液，如血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸出液。营养价值高，但是成分复杂，而且不稳定，来源也受到限制，大规模工业生产使用受限。血清是天然华体会体育最新地址中最有效和最常用的华体会体育最新地址，有些成分功能明确，有些成分功能不明确。血清来源有胎牛血清、新生牛血清或成牛血清、马血清、鸡血清、羊血清及人血清，最广泛应用的为胎牛血清和新生牛血清。血清长期保存条件为-20℃至-70℃，4℃冰箱保存时间不能超过1个月，瓶装血清解冻需逐步解冻，切勿直接将血清从-20℃至-70℃解冻。

2、经典/基础华体会体育最新地址：基础华体会体育最新地址是明确的化学成分配制的华体会体育最新地址，组分稳定，可大量供应。细胞种类和培养条件不同，适宜的合成华体会体育最新地址也不同，在动物细胞培养中，最常用的有BME、MEM、DMEM、IMEM、HAMF12、PRMI1640、M199等配方。基础华体会体育最新地址发展时间较长，配方公开，生产工艺成熟，基础华体会体育最新地址市场供应充足，市场规模比较大，是细胞华体会体育最新地址市场的主要产品。针对特定细胞表达产物，可以通过筛选合适的细胞株，并定制化研发基础华体会体育最新地址，降低血清添加浓度，可以简化分离、纯化及检测工艺，降低生产成本，提高细胞表达蛋白的产量和质量。现在市场上，标准化基础华体会体育最新地址和定制化基础华体会体育最新地址并行存在。大公司向细胞华体会体育最新地址公司定制化研发基础华体会体育最新地址，小公司直接购买标准化基础华体会体育最新地址。基础华体会体育最新地址保存温度为2-8℃，与血清保存温度不兼容，在使用时需要现场配置，并在1周左右用完。

3、无血清细胞华体会体育最新地址（SFM）：无血清华体会体育最新地址是一个包含无机盐、氨基酸、糖、维生素及其它必须营养物的等渗透压且具有pH缓冲能力的混合物。无血清细胞华体会体育最新地址提高了细胞表达蛋白的产量和质量，可简化分离、纯化及检测工艺，降低生产成本，适用于CHO细胞、杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞及BHK细胞，是最适合于生物药生产的华体会体育最新地址。

二．经典/基础华体会体育最新地址的种类

这其中又以经典/基础华体会体育最新地址最为常用。下面介绍：

经典的华体会体育最新地址有很多种，Invitrogen (GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的华体会体育最新地址。其他如M199、IMDM、L15华体会体育最新地址等也用于某些细胞的培养。

◆ mem 是由Eagle’s基础华体会体育最新地址 (BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。

◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)华体会体育最新地址是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。

◆aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。

◆Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种华体会体育最新地址已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。

◆ RPMI 1640华体会体育最新地址是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。

三．经典/基础华体会体育最新地址的重要组分及作用

确定了华体会体育最新地址种类之后，还会遇到华体会体育最新地址有不同配方分型的情况。下面介绍经典华体会体育最新地址中不同成分的作用及选择原则。了解以下原则后可根据 meilunbio® 基础华体会体育最新地址交叉对比表选择符合实验需求的分型华体会体育最新地址。

D-葡萄糖（D-Glucose）

作用：细胞生长所需的主要能量来源。

最初的 DMEM 中，葡萄糖浓度为1 g/L，现在称其为低糖型 DMEM，适合培养代谢作用较慢、依赖性贴壁细胞的哺乳动物细胞。
高糖型 DMEM 中的葡萄糖浓度为4.5 g/L，普遍应用于生长快、粘附性低的细胞、杂交瘤的骨髓瘤细胞、克隆细胞、DNA 转染的转化细胞、原代病毒宿主细胞、单一细胞的培养以及疫苗的生产，例如利用CHO 细胞表达 EPO 和生产乙肝疫苗。
使用无糖华体会体育最新地址的主要目的是，通过控制细胞的能量来源，研究细胞的代谢过程或葡萄糖利用效率。

L-谷氨酰胺（L-glutamine）

作用：L-谷氨酰胺是一种氨基酸，细胞的重要能量来源，参与蛋白质的合成，也为合成核酸提供碳源。

存在的问题：

L-谷氨酰胺不稳定，在中性的水溶液中会自发降解。
降解产物氨对细胞有毒性。
对氨敏感的细胞（如干细胞和原代细胞等）或培养环境（高密度反应器，无补料的长期培养）不推荐含 L-谷氨酰胺的华体会体育最新地址。

解决方案：

选择不含谷氨酰胺的华体会体育最新地址，使用前自行添加 L-谷氨酰胺。
选择稳定的谷氨酰胺替代物含 L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。

丙酮酸钠（Sodium pyruvate）

作用：能量来源

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源
葡萄糖不足的时候，细胞可以代谢丙酮酸钠
保证细胞更好地生长
非必需组分

HEPES

作用：pH 缓冲剂。

是一种氢离子缓冲剂，其作用不依赖于二氧化碳。
在一定范围内对细胞无毒性作用，能较长时间控制恒定的 pH 范围，保证细胞良好生长。
部分细胞对酸碱度的变化非常敏感，建议使用含有 HEPES 的华体会体育最新地址。
添加后价格相对较高，非必需。

酚红（Phenol red）

作用：pH 值指示剂，pH 值低时华体会体育最新地址呈黄色，pH 值高时华体会体育最新地址呈紫色，pH 值 7.2～7.4 时为红色，最适合细胞培养。

在一些无血清华体会体育最新地址的配方中酚红会干扰钠-钾平衡培养，干细胞或细胞克隆时倾向于不加酚红。
酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素），在培养雌激素敏感的细胞（如乳腺组织）时，建议使用不含酚红的华体会体育最新地址。
酚红的颜色会对流式细胞分析产生一定的干扰，不建议使用含酚红的华体会体育最新地址制备细胞样品。

碳酸氢钠（Sodium bicarbonate）

作用：pH 缓冲剂。

pH 6.8-7.8 为细胞生长的最佳 pH 条件，多数华体会体育最新地址利用碳酸氢钠进行缓冲。
碳酸氢钠的缓冲需要二氧化碳。高碳酸氢钠 (1.5-3.7g/L) 需要 5-10%二氧化碳；低碳酸氢钠 (0.35g/L)不需要二氧化碳培养箱。
干粉华体会体育最新地址需要在配制时单独添加碳酸氢钠。

选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：

(1)建立某种细胞株所用的华体会体育最新地址应该是培养这种细胞首选的华体会体育最新地址。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。

(2) 其它实验室惯用的华体会体育最新地址不妨一试，许多华体会体育最新地址可以适合多种细胞。

(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择华体会体育最新地址。如小鼠细胞株多选RPMI1640 。

(4) 用多种华体会体育最新地址培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳华体会体育最新地址，这是最客观的方法，但比较繁琐。

细胞系	细胞类型	种	组织	华体会体育最新地址
293	成纤维细胞	人	胚胎肾	MEM, 10% 热灭活马血清
IMR-90	成纤维细胞	人	肺	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
W1-38	成纤维细胞	人	胚胎肺,3月妊娠	MEM, 10% 胎牛血清
A549	上皮细胞	人	肺癌	F-12K, 10%胎牛血清
A431	上皮型	人	表皮细胞癌	DMEM, 10% 胎牛血清
BHL-100	上皮细胞	人	乳房	McCoy'5A, 10% 胎牛血清
BeWo	上皮滋养层	人	绒毛癌	F-12K, 15%胎牛血清
Caco-2	上皮细胞	人	结肠腺癌	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
Chang	上皮细胞	人	肝脏	BME, 10% 小牛血清
HCT-15	上皮细胞	人	结肠直肠腺癌	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
HeLa	上皮细胞	人	子宫颈癌	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA(in suspension, S-MEM)
HEp-G2	上皮细胞	人	肝细胞癌	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
HEp-2	上皮细胞	人	喉癌	MEM, 10% 胎牛血清;或RPMI-1640, 10% 胎牛血清
HT-1080	上皮细胞	人	纤维肉瘤	MEM, 10% HI 胎牛血清和NEAA
HT-29	上皮细胞	人	结肠腺癌	McCoy'5A, 10% 胎牛血清
JEG-2	上皮细胞	人	绒毛膜癌	MEM, 10% 胎牛血清
MCF7	上皮细胞	人	乳腺癌	MEM, 10% 胎牛血清NEAA, 10ug/ml 胰岛素
KB	上皮细胞	人	口腔癌	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
Saos-2	上皮细胞	人	骨肉瘤	McCoy'5A, 15% 胎牛血清
WI-38	上皮细胞	人	胚胎肺	BME, 10% 胎牛血清
WISH	上皮细胞	人	羊膜	BME, 10% 胎牛血清
WS1		人	胚胎皮肤	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
HUVEC	内皮细胞	人	脐带	F-12K, 10% 胎牛血清和肝素盐100 ug/ml
EB-3	淋巴样	人	Burkitt淋巴瘤	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
Raji	淋巴样	人	Burkitt淋巴瘤	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
IM-9	成淋巴细胞	人	骨髓瘤病人骨髓	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
Daudi	成淋巴细胞	人	淋巴瘤病人血液	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
H9	成淋巴细胞	人	T细胞淋巴瘤	RPMI-1640, 20% 胎牛血清
HL-60	成淋巴细胞	人	早幼粒细胞白血病	RPMI-1640, 20% 胎牛血清
Jurkat	成淋巴细胞	人	T细胞白血病	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
K-562	成淋巴细胞	人	骨髓性的白血病	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
U937	淋巴样	人	组织细胞淋巴瘤	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
KG-1	骨髓白细胞	人	红白血病病人骨髓	IMDM, 20% 胎牛血清
McCoy	成纤维细胞	小鼠	未知	MEM, 10% 胎牛血清
BALB/3T3	成纤维细胞	小鼠	胚胎	DMEM, 10% 胎牛血清
3T6	成纤维细胞	小鼠	胚胎	DMEM, 10% 胎牛血清
A9	成纤维细胞	小鼠	结缔组织	DMEM+10% 胎牛血清+6-硫鸟嘌呤（30μg/ml）+2,6-二氨基嘌呤（30μg/ml）
AtT-20	上皮细胞	小鼠	垂体肿瘤	F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
Clone M-3	上皮细胞	小鼠	黑素瘤	F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
I-10	上皮细胞	小鼠	睾丸癌	F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
Y-1	上皮细胞	小鼠	肾上腺瘤	F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
WEHI-3b	类巨噬细胞	小鼠	骨髓单核细胞白血病	DMEM, 10% 胎牛血清
ES-D3	胚胎型	小鼠	多能胚胎干细胞	DMEM+ 15% 胎牛血清+100μmol/L 2-巯基丙醇
F9	胚胎型至内胚层	小鼠	睾丸畸胎癌	DMEM, 15% 胎牛血清
BHK-21	成纤维细胞	仓鼠	肾	GMEM, 10% 胎牛血清或MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
HaK	上皮细胞	仓鼠	肾	BME, 10% 小牛血清
CHO-K1	上皮细胞	仓鼠	卵巢	F-12, 10%胎牛血清
AR42J	.	大鼠	胰腺肿瘤	Ham'sF-12K, 20%胎牛血清
BRL3A	.	大鼠	肝	Coon'sF-12K, 5%胎牛血清
Clone 9	上皮细胞	大鼠	肝脏	F-12K, 10%胎牛血清
H4--Ⅱ-E-C3	上皮样	大鼠	肝癌	F-12K, 10%胎牛血清`
GH1	上皮细胞	大鼠	垂体肿瘤	F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
GH3	上皮细胞	大鼠	垂体肿瘤	F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
IEC-6	上皮样	大鼠	正常小肠	DMEM, 5% 胎牛血清,胰岛素0.1μg/ml
L2	上皮细胞	大鼠	肺	F-12K, 10%胎牛血清
XC	上皮细胞	大鼠	肉瘤	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
LLC-WRC 256	上皮细胞	大鼠	癌	199华体会体育最新地址 , 5% 马血清
Jensen	成纤维细胞	大鼠	肉瘤	McCoy's 5A, 5% 胎牛血清
Rat2(TK-)	成纤维细胞样	大鼠	Rat2(TK-)克隆衍生	DMEM, 5% 胎牛血清,30μg/ml BrdU
PC12	NGF诱导的神经表型细胞	大鼠	肾上腺嗜铬细胞	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
L6	大鼠	大鼠	骨骼肌成肌细胞	DMEM, 10% 胎牛血清
D-17	上皮细胞	狗	骨肉瘤	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
BT	成纤维细胞	牛	鼻甲骨细胞	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
MARC-145		猴	猴肾	MEM或DMEM, 10%小牛血清
CV-1	成纤维细胞	猴	非洲绿猴肾	MEM, 10% 胎牛血清
COS-1	成纤维细胞	猴	肾	MEM, 10% 胎牛血清
COS-3	成纤维细胞	猴	肾	MEM, 10% 胎牛血清
COS-7	成纤维细胞	猴	非洲绿猴肾	MEM, 10% 胎牛血清
Vero	成纤维细胞	猴	非洲绿猴肾	199华体会体育最新地址，5% 胎牛血清
B95-8	成淋样	绒猴	EB病毒感染的白血病细胞	RPMI-1640, 10% 胎牛血清
CRFK	上皮细胞	猫	肾	MEM, 10% 胎牛血清和NEAA