凝胶填料的简介:

一些长链的糖类物质或者有机物单体通过一定的技术手段凝聚或者聚合成为有孔或者无孔的球状物即可成为层析填料

1）琼脂糖基质填料：用途最为广泛，可用于制备不同类型的凝胶填料，如亲和层析，离子交换层析填料

2）葡聚糖基质填料：用途较为广泛，一般制备成不同孔径的分子筛层析填料

3）聚合物基质填料：具有较好的耐压性能，可制备成不同类型的凝胶填料，如亲和层析，离子交换层析填料

※好的凝胶填料一般外表成球较为规整，粒径均一，具有较窄的粒径分布范围，不含有破损的微球

琼脂糖基质凝胶填料

1）表面光滑，完整的球形

2）微球表面含有孔，方便蛋白分子进入

3）微球表面含有孔并且具有交错的接枝，可以捕获更多蛋白

根据层析技术原理对填料分类：

• 1.凝胶过滤填料
• 2.离子交换填料
• 3.亲和填料
• 4.疏水填料
• 5.反相填料

根据蛋白性质合理选择层析方法：

蛋白性质	层析方法
电荷	离子交换层析(IEX)
蛋白大小(分子量)	凝胶过滤层析(GF)
疏水性	疏水层析(HIC)或反向层析(RPC)
生物识别	亲和层析(AC)
电荷、配体特异性或疏水性	膨胀床吸附层析(EBA)

不同的层析方法适用于不同的纯化阶段

方法	特点	蛋白捕获	中度纯化	精度纯化
IEX	高分辨率高载量 高流速	★★★	★★★	★★★
HIC	高分辨率高载量 高流速	★★	★★★	★
AC	高分辨率高载量 高流速	★★★	★★★	★★
GF	高分辨率		★	★★★
RPC	高分辨率		★	★★★

一般来说，蛋白的纯化需要组合使用不同的填料进行纯化：

※在蛋白的捕获阶段，选用对目标蛋白结合能力强，对杂蛋白结合尽可能弱的层析方法，如：选择对目标蛋白具有高特异性和高载量的层析填料

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