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一、蛋白质纯化的概念

蛋白质的分离纯化方法是生命科学领域关注的热点之一。 蛋白质的分离纯化就是根据蛋白质的理化性质特点，采对混合物质中蛋白质分离的过程。

二、蛋白质分离纯化的方法

沉淀法：

（1）盐析沉淀法；

（2）等电点沉淀法；

（3）有机溶剂沉淀法。

离心法：

（1）差速离心法；

（2）密度梯度离心法。

层析法：

（1）离子交换柱层析法；

（2）疏水相互作用层析法；

（3）置换层析法；

（4）亲和层析法；

（5）高效液相色谱法。

电泳法：

（1）聚丙烯酰胺凝胶电泳法；

（2）等电聚焦电泳法；

（3）毛细管电泳法。

萃取法：

（1）双水相萃取技术；

（2）浊点萃取法；

（3）反胶团萃取法。

三、蛋白质盐析纯化的原理

中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。

四、蛋白质盐析纯化的流程

4.1

蛋白质的预处理

分离纯化某一蛋白质首先要将蛋白质从原来的组织中释放出来，并且保持原有的天然状态，不丢失活性物质。因此，根据分离纯化的原料不同，要采取不同的方法进行预处理。例如，动物材料要去掉结缔和脂肪组织，植物组织和细菌要将细胞壁进行破碎。破碎主要采取超声波振荡、研磨、高压挤压或酶处理等方法。组织和细胞破碎以后，选择适当的缓冲溶液将目的蛋白质提取出来，细胞碎片等不溶物质用离心或者过滤的方法除去。

4.2

蛋白质的粗分离

选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。一般采用沉淀法。

4.3

蛋白质的精细纯化

粗提得到的蛋白质溶液中一般含有其他的蛋白质杂质，必须进一步的分离提纯才能得到有一定纯度的目的蛋白样品。一般采用层析法。