发酵菌种:不同级别菌株定义及注意事项

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一、标准菌株:

官方菌种保藏机构买到的0代菌株为标准菌株,它是根据菌株特性至少定义到属或种的水平的菌株。我们经常使用的标准菌株来自于两大菌种保藏中心:

其一为中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心(CMCC),它提供冷冻干燥菌种(0代)及保存于冻存管中的黑曲霉0代孢子悬液菌种。

CMCC(B)代表细菌(bacteria)

CMCC(F)代表真菌(fungi)

其二为美国模式培养物集存库(ATCC),ATCC的菌株则需有相应的文件来证明ATCC的菌株特性与CMCC是等效的。要注意的是从省市药检所买到的标准菌株,不是0代的,需问清购买到的是第几代菌株。

二、标准储藏菌株

标准菌株经过复苏、复壮并采用适宜的方法保存得到的菌种,即为标准贮备菌株一般为标准菌株传代1-2次而得。

三、工作菌株:

标准贮备菌株再传代培养得到的菌株即为工作菌株;平常试验用菌株为工作菌株。

四、注意事项:

1工作菌株是不可以从冰箱中取出直接使用的,需在实验前进行活化;

2从标准菌株到实验使用的菌悬液的传代次数应不得超过5代,以防止过度的传代增加菌种变异的风险。在2015版药典“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”中明确指出:任何形式的转种均被认为是传代1次。

3标准菌株复苏后的一代,一般是不保存的,因为菌种刚刚从冻干粉的状态复苏,活性还未恢复到最佳状态,再复壮而得的二代菌种,也就是标准储备菌株,需进行纯度和特性的确认,这个确认记录可证明在操作过程中,菌株未污染杂菌且活性与标准菌株一致。

4保藏时应选择适宜的菌种保存方法,并注意标示必须清晰明确。由于在试验过程中,实验菌种的活性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件,大家也越来越重视实验菌种的状态,如果保藏方法及管理不善,菌种优良特性便会退化、丧失,甚至导致死亡,就会影响实验结果。

五、倍增时间:

倍增时间不是代数,倍增时间是菌株特性,不同菌株起菌快慢不一样,具体工艺需要结合倍增时间、华体会体育最新地址 及生长曲线等进行设计

对数生长期细胞的生长速率快速拉升,期间微生物的比生长速率最大,且菌体生长不受基质浓度限制,繁殖速率极快,细胞数量或质量等生物量一般呈指数增长,根据比生长速率定义有:

μ=dCX/dt▪1/CX

积分变形可得:

lnCX1=lnCX0+μ▪t

继续变形:

μ▪t=(lnCX1-lnCX0)

则倍增时间td:

= lnCX1-lnCX0 /μmax

= ln2/1/μmax

=0.693/μmax

其中:

μ:比生长速率

CX0:起始菌体浓度(g/L)

CXt:经过一段时间t后的菌体浓度(g/L)

CX:菌体浓度泛指(g/L)

td:菌体浓度增大一倍时所需要的时间min

不同微生物的倍增时间不一,常见微生物td见下表:

//细胞

温度℃

时代时间min

海拉细胞

37

1800~3000

啤酒酵母

30

120~240

绿色木霉

30

300

球形红极毛杆菌

30

132

片形螺旋藻

35

120

黑曲霉

30

120

恶臭假单胞菌

30

45

枯草杆菌

40

26

大肠埃希氏菌

40

21

生氮假单胞菌

30

10

嗜热脂肪芽孢杆菌

60

8.4

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