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细胞培养是指将细胞从动物或植物体内取出，然后在适宜的人工环境中生长的过程。细胞可以在培养前直接从组织中取出并通过酶或机械方法进行解离，也可以来源于已建立的细胞系或细胞株。

原代培养原代培养是指细胞从组织中分离出来后，在适宜条件下增殖，直到它们占据所有可用的基质（即达到汇合状态）的培养阶段。在此阶段，必须通过将细胞转移到含有新鲜生长华体会体育最新地址的新容器中进行继代培养（即传代），以为其提供更多的继续生长空间。

细胞系第一次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。来自于原代培养的细胞系寿命有限，随着细胞的传代，生长能力最强的细胞会占据优势，最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。

细胞株如果通过克隆或其他方法从培养物中阳性筛选出了细胞系的亚群，则该细胞系成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比，细胞株通常会获得一些其他的遗传学改变。

那么在细胞培养之前，我们先简单讲以下细胞冻存与复苏。

细胞冻存与复苏

当细胞生长状况较好或者代数较早时，需及时大量的冻存。

细胞冻存液比例为华体会体育最新地址：血清：DMSO=7:2:1，也可血清：DMSO=9:1。细胞冻存密度通常为1-3×106个/ml。细胞冻存采用慢冻方式，减少冰晶形成，避免细胞损伤。通常4℃放置0.5 h，-20℃放置2 h，-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

细胞复苏时升温要快，防止在解冻过程中水分进入细胞，形成冰晶，影响细胞存活。38℃水浴不时摇动，在1分钟内使其完全融化，1000rpm离心5min,弃去上清，用新鲜华体会体育最新地址重悬移入培养瓶中。

下面，我们讲一下细胞的培养。细胞培养作为生物实验的基础操作，在各位研究僧的日常中占着相当大的分量。细胞培养的好，实验事半功倍。

污染防控

细胞培养最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和细胞系间交叉污染的防控。

实验中需保持良好的操作习惯，所用材料的位置摆放要顺手，污染源和已灭菌物品要分开放置。实验室也需定期清洁与消毒。

细胞培养瓶

目前商品化的细胞培养瓶主要为瓶盖是否带气孔两种。其中不带透气孔细胞培养瓶拧紧后需适当回旋瓶盖，保证CO2能顺利进入细胞培养瓶。

细胞培养过程中，对于适应能力强的肿瘤细胞，可在传代3-4次后更换新的细胞培养瓶。对于非肿瘤细胞系如293T，HEK293等细胞，建议每次传代更换新的细胞培养瓶来保证细胞状态。

血清与华体会体育最新地址

通常血清的添加比例为10%，当然也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。在更换血清品牌或者批次时，最好需对血清的品质进行验证，防止对实验造成影响。

对于华体会体育最新地址，目前商品化的比较成熟，稳定性也较好。如若需自配华体会体育最新地址时，过滤前搅拌时间不宜过长（华体会体育最新地址中营养丰富，细菌常温下20min就可繁殖一代，其代谢产物会对华体会体育最新地址的品质产生影响）。华体会体育最新地址过滤除菌后，应对华体会体育最新地址进行无菌验证，防止污染。

细胞传代

正常细胞形态较好，轮廓清晰，边缘透亮，细胞增殖状况良好。当贴壁细胞长到密度90%时，需进行传代。

传代时通常使用胰酶消化法。该方法又分为干消化法和湿消化法。

干消化法：胰酶浸润后弃去胰酶，待细胞变圆后加入新鲜华体会体育最新地址吹下后再进行细胞传代。

湿消化法：待细胞变圆，肉眼观察下成流沙状脱落时即可加入新鲜华体会体育最新地址终止消化，1000rpm离心5min,弃去上清，用新鲜华体会体育最新地址重悬传代。

吹打细胞时，手法要轻柔，避免吹打出气泡，造成细胞因内外压差破裂，同时需避免刮到瓶壁影响细胞的贴壁。

不同细胞的贴壁能力不同，消化时间不同；不同细胞细胞间连接强度不一样，消化时间不同；同一细胞生长状状况不同，消化时间不同。消化时适时观察细胞形态，避免因过度消化影响细胞活性。

传代间隔时间和传代比例因细胞而异。细胞传代过程中，当细胞出现状态不好或者污染时及时弃去细胞，重新复苏。

以上为细胞冻存，复苏与培养，希望能对大家有所帮助，关于细胞培养，自动化细胞计数仪肯定是必不可少的，Tank细胞计数仪，拥有自动化，合规化，高通量等优势，能够帮助您在实验室里高效率，高标准的完成细胞计数和细胞检测等工作，是您细胞科研领域的强力伙伴。