感受态细胞(competent cell)：是指受体(宿主)细胞最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。主要原理是通过处理使细胞的通透性变大(细胞膜表面出现一些孔洞)，便于外源基因或载体进入感受态细胞，在感受态细胞中得到复制扩增，得到多个拷贝的外源基因或载体。大肠杆菌作为生物工程最常用的工程菌，其感受态的制备方法也有多种，制备出的感受态细胞质量也各不相同，本文介绍一种超级感受态细胞的制作方法，其转化效率高，转化后质粒拷贝数多。

大肠杆菌超级感受态细胞制作步骤：

1、用无菌牙签挑取DH5α E.coli，划线于LB平板，过夜培养。

2、挑单菌落至3mlLB华体会体育最新地址 中，37℃，180rpm摇12h。

3、转移该3ml 菌液到 SOB培养液锥形瓶（250mL）中，200-250rpm 18℃摇30h至OD600=0.6。

4、将摇好的瓶子放于冰上10min，分装于预冷的50ml离心管中，冰上放置。

5、4℃，3000rpm离心10min，弃上清，倒扣于无菌纸上尽可能的吸干残余培养液。

6、用80ml预冷的TB液悬浮细菌沉淀（轻轻旋转离心管，无需振荡或者吹打）。

7、冰上放置10min后，4℃、3000rpm离心10min，弃上清。倒扣于无菌纸上尽可能吸干残余TB液。

8、用18.6ml预冷的TB液悬浮细菌沉淀。（轻柔，勿剧烈振荡）

9、加入1.4ml预冷的DMSO，轻轻混匀，放置冰上 10min。

10、迅速将悬液分装于预冷的离心管中，100ul/管，盖紧盖子投入液氮中快速冷冻，后储存与-80℃备用。

所用试剂配方
	Tryptone /g	Yeast Extract /g	NaCl /g	其他/g
LB (pH 7.0， 500mL)	5	2.5	5	0
SOB（500ml）	10	2.5	0.293	KCl (0.093)、MgCl2•6H2O (1.016)、MgSO4•7H20 (1.232)
PIPES(0.5M, pH 6.7)	7.55g PIPES粉末溶于40ML ddH2O中，用5mol/L的KOH调至PH6.7，定容至50ML，过滤灭菌。-20℃储存。
TB(500 mL)	MnCl2·4H2O	CaCl2·2H2O	KCL	PIPES（过滤灭菌）/ml
	5.44g	1.10g	9.325g	10
KOH(5M,50mL)	14g KOH溶于50ml ddH2O中，用于调PIPES PH值

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