hth网页入口

一、维生素K2的简介

维生素K并非单一物质，而是一类具有醌类结构的脂溶性化合物。自然界中的维生素K主要有两种类型， 第一种是维生素K₁，也称为叶绿醌，主要来自于植物;第二种是维生素K₂，也称为甲萘醌，主要由微生物代谢产生， 最初是从纳豆中分离得到。人工合成的有维生素K₃、K₄、K₅和K₇等。

纯品维生素K2为黄色粉末，其结构是由一个甲基萘醌母环和一条位于母环C3位置上的异戊二烯侧链组成，根据侧链上异戊二烯单元个数差异，维生素K2共分为14种，以MK-n表示（如下图），MK-7即表示侧链上含有7个异戊二烯单元的维生素K2，在纳豆中所含的维生素K2中绝大部分即是MK-7，大约占98%，剩下的还有少量的MK-4。

二、维生素K2的生理功能

维生素K2有助于血液凝固：

在体内，维生素K作为一个辅因子参与某些蛋白质中谷氨酸残基转移后的y-羧化作用。这些蛋白质包括维生素依赖性的凝血因子II(凝血素)、VII(前转化素)、IX(克雷斯马斯因子)、X(斯图亚特因子)、蛋白质C、蛋白质S、蛋白质Zv和生长抑制专一因子(Gas6)。

维生素K2可能直接参与骨骼代谢：

研究人员已经在人体骨骼中发现两种维生素依赖性蛋白--骨钙素，也被称之为Y羧基谷氨酸(骨Gla蛋白或者BGP)和基质Gla蛋白(MGP)，Y-羧化作用的发生即是由维生素K依赖性的y-羧化酶催化的。

三、发酵法生产维生素K2的工艺流程

3.1实验材料

3.1.1 实验菌株与质粒

筛选获得的解淀粉芽孢杆菌Y-2，质粒根据需求选择。

3.1.2 主要实验试剂

酵母提取物、蛋白胨、聚合酶、内切酶、试剂盒等。

3.1.3 主要实验仪器

灭菌锅、恒温干燥箱、摇瓶柜、离心机等。

3.1.4 华体会体育最新地址

种子华体会体育最新地址、发酵华体会体育最新地址、菌种传代保藏华体会体育最新地址、LB华体会体育最新地址、枯草芽孢杆菌转化华体会体育最新地址、重组质粒表达华体会体育最新地址。

3.2实验方法

3.2.1平板与斜面培养方法

将平板或斜面在37±1℃条件下培养8-12h。

3.2.2 种子培养方法

从平板上挑取一环菌种接入种子华体会体育最新地址中，在37±1℃条件下的往复式摇床上培养8 h，振荡频率为100±2次/min，振幅为8cm。

3.2.3 摇瓶发酵培养方法

将对数生长期的种子液按2%接种量(体积比)转接于发酵华体会体育最新地址中，在37+1℃条件下的往复式摇床上培养24h。

3.3样品中维生素K2的提取方法

发酵结束后，将发酵液在5000r/min条件下离心5min，分别收集上清液和菌体。在上清液中按4体积的发酵液加入1体积的萃取液，漩涡振荡10min，5000r/min离心5min后取上清，对下层发酵液重复萃取一次，合并萃取液。在对菌体的萃取过程中，萃取液的使用量与萃取发酵液时的使用量相同，同样萃取两次，合并萃取液。于40℃减压旋转浓缩，得到淡黄色油状物。加入4mL正己烷溶解，转移到10mL离心管中，并用少量正己烷润洗后合并加入，通N2吹干，加入1mL上机液溶解，022μm微孔滤膜过滤后用于HPLC分析。在提取过程中需要尽量避光。