大肠杆菌作为表达外源蛋白最常用的表达系统，其具有培养周期短，蛋白表达量高，表达时间段，表达成本低等优点。在使用大肠杆菌表达外源蛋白时，为了减轻下游纯化的压力，通常会在表达的目标蛋白前或者后添加融合标签进行共表达。当融合蛋白表达完成后，通过对大肠杆菌进行裂解，其中的融合蛋白会释放出来，通过相应的填料或纯化介质对融合蛋白的标签进行特异性的吸附，就可将目标蛋白与裂解液中的其它杂蛋白或杂质分离开来。纯化标签蛋白常常会使用过层析柱的方式，然而该方式需要对裂解后的大肠杆菌进行离心和过滤处理，然后才能过层析柱纯化，纯化的方式可分为使用重力柱纯化和使用层析仪纯化，纯化时间的长短与纯化样品体积和样品个数呈正比。本文通过介绍一种新的蛋白纯化方法从大肠杆菌裂解液中纯化标签蛋白，它省去了离心和过滤的样品前处理过程，还可以对多个样品进行同时纯化，它既节约了时间和耗材成本，又简化了试验操作流程，对纯化所需的设备要求也更低。下面以6×His Tag融合标签蛋白的纯化为例，介绍Ni-IDA Magbeads(磁珠)的使用方法。

样品及试剂信息：

大肠杆菌裂解液(内含6×His Tag融合标签蛋白)

平衡缓冲液：50 mM磷酸盐, 300 mM NaCl, 10 mM咪唑, pH7.0~8.0

洗脱缓冲液：50 mM磷酸盐, 300 mM NaCl, 250 mM咪唑, pH7.0~8.0

磁珠：Ni-IDA Magbeads(南京玉珠隆生物)

磁力架(市售，不限品牌)

纯化流程：

①根据经验预估样品中所含目标蛋白含量

②向样品中加入适量的Ni-IDA Magbeads

③磁珠和样品一起孵育1小时

④用磁力架将磁珠吸附后，倒去溶液部分

⑤用平衡缓冲液清洗磁珠3~5次，去除杂质

⑥用洗脱缓冲液将磁珠结合的6×His Tag融合标签蛋白洗脱

纯化结果：

结论：