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质粒提取是分子生物学实验室一项最基本的工作。目前的大量质粒提取方法都相对烦琐，一般需要4h左右。本文介绍了一种非常简便的大量提取质粒方法，使大量提取质粒的时间小于2h，产量高，无RNA与基因组DNA污染。此法提取的质粒可直接用于酶切鉴定、转化、探针标记等．本文以菌种转化了重组pUC19质粒的DH5α E.coli为例介绍了一种大量纯化质粒的简单方法．

实验方法

①挑一个单菌落接种于5mL LB／Amp(含氨苄青霉素0.1mg/mL)培养液中，37℃，180rpm振荡过夜培养

②取1mL菌液接种于100mL LB／Amp 培养液中，37℃，180rpm振荡过夜培养

③将菌液倒入两个50mL 离心管，10000g 离心2min，弃去上清

④向沉淀中加入4mL STET (100g/L蔗糖，50mmol/L Tris-HCI，50mmol/L EDTA ，20g/L Triton X-100，pH8.0)溶液，充分混悬菌泥，然后加入8mL 0.2mol/L NaOH，轻柔混匀，静置3min

⑤加入6mL 3mol/L醋酸钠溶液( pH4.8～5.2) ，颠倒混匀68℃水浴10min，12000g离心5min

⑥转移上清至新的50mL离心管，加0.6倍上清液体积的异丙醇，混匀室温放置10min，12000g 离心15min

⑦弃上清，用10mL 70%乙醇洗涤沉淀，真空干燥，加入1mL TE 重溶沉淀，以500μL分装入两个1.5mL 离心管，加1μL RNaseA (20mg/mL) 混匀后68℃水浴10min，12000g离心3min

⑧转移上清至新的1.5mL离心管，加入300μL异丙醇混匀，室温静置5min，12000g离心10min

⑨倒弃上清，用500μL 70%乙醇洗涤沉淀两遍，真空抽干，将沉淀重溶于适量的TE或水中，酶切鉴定

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