大肠杆菌感受态细胞转化的作用：

（1）将重组质粒DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；

（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；

（3）用于分子生物学其他研究。

质粒DNA粘附在大肠杆菌感受态细胞表面，经过 42℃短时间的热击处理，促进吸收DNA。然后在非选择华体会体育最新地址 中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的华体会体育最新地址 中生长。

旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5mL离心管，离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。

连接反应后的重组质粒，LB液体华体会体育最新地址 （不加抗菌素），LB固体华体会体育最新地址 （加抗菌素），无菌 ddH2O，IPTG，X-gal

无菌 ddH2O，1.5mL 离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V）过滤除菌，2% X-gal（M/V，用 N,N-二甲基甲酰胺配）过滤除菌。

（1）事先将恒温水浴锅的温度调到 42℃。

（2）从-80℃ 超低温冰柜中取出一管（100uL）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴 5~10min。

（3）加入5uL连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。

（4）轻轻摇匀后插入 42℃水浴中90秒进行热激，然后迅速放回冰中，静置 3~5min。

（5）在超净工作台中向上述离心管中加入 500uL LB 华体会体育最新地址 （不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上 37℃震荡 1h。

（6）在超净工作台中取上述转化混合液 50~100uL，滴加到含合适抗菌素的LB固体平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂）。

（7）如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加 40uL 2% X-gal，8uL 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。

（8）在涂好的培养皿上做上标记，先放置在 37℃恒温培养箱中 30-60min 直到表面的液体都渗透到华体会体育最新地址 里后，再倒置过来放入 37℃恒温培养箱过夜。

（9）观察平板上长出的蓝色和白色菌落克隆(如下图)，以菌落之间能互相分开为好。其中白色菌斑为所需的菌斑。挑取白色菌斑进行后续的培养即可。