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前言

XBB目前已传入我国，在上海、杭州等地均监测到XBB的存在，尚未形成优势传播，过去菌菌对XBB变种进行过详细介绍，详见【对症创药】新变种XBB大杀四方，口罩已是新时代烙印。XBB是BA.2.10.1和BA.2.75变种的混合体，目前在印度和新加坡较为流行，传播系数高达20。而XBB.1.5则是XBB的亚型毒株。2022年12月31日，美国疾控中心的最新数据表明大约有40%新确诊的美国新冠感染患者的毒株为XBB.1.5，其中20%是新近一周才感染的——也就是它刚刚开始流行。它们的传播特点：XBB传播力较BA.5 和BA.2都快；XBB.1.5传播力更强，因为它与人体细胞结合更稳。它们的毒性特点：XBB没有发现重症率比其他毒株更高；由于数据不多，难以判断XBB.1.5重症率更高。

随着新冠病毒的不断变异，抗原作为免疫诊断工具对于检测是否感染新冠病毒是必不可少的。相信大家都用过抗原试剂盒自测是否感染了新冠病毒。那么大家知道新冠抗原检测的原理吗？

图1 抗原检测结果分类

“抗原检测”检测的是什么？

抗原检测是检测病毒表面的蛋白。抗原，可以简单理解为病毒穿的“衣服”，抗原检测就是从抗体出发去测“衣服”的部分，让病毒显示出来。抗原检测更方便快捷，但敏感度稍差。而核酸检测则是检测病毒里面的基因。核酸检测操作更复杂，获取结果时间长，但敏感性和特异性更高。

图2 新型冠状病毒横切面

新型冠状病毒的这层“衣服”异常绚丽（图2），其膜上有刺突糖蛋白（S）、包膜蛋白（E）和膜蛋白（M）。在这些结构蛋白中，核衣壳蛋白（N蛋白）在不同SARS-CoV-2病毒株系中高度保守，且具有良好的免疫原性，为病毒侵染细胞后表达量最高的结构蛋白，是良好的检测生物标志物。目前，新型冠状病毒抗原检测一般以检测N蛋白为主。

新冠病毒抗原检测的原理——胶体金法

胶体金是金盐被还原成金单质后形成的金颗粒悬浮液，通常为红色，并且在碱性条件下表面带负电，因此可以与带正电的物质结合（如新冠病毒抗体），这两个特性使肉眼无法看见的新冠抗体可以通过胶体金的颜色进行呈现。

图3 胶体金的结构

抗原检测试剂盒的硝酸纤维素膜（NC膜）上有3种抗体，具体有（图4）：

抗体1：能够结合新冠病毒抗原，同时还携带了金原子胶体的抗体，俗称金标抗体；

抗体2：能够结合新冠病毒抗原，但不携带金原子胶体；

抗体3：能够结合抗体1的抗体，即二抗。

抗原检测盒里面有多层试纸，抗体1分布在试纸最前端的金垫上，而且可以移动，抗体2固定在检测线（T线）部位，抗体3固定在质控线（C线）部位。当溶液滴到试纸上时，由于毛细现象，溶液会从左到右逐渐布满整个试纸。

图4 抗原检测原理图^[1]

T线显色的原理：

加样后，样品向前流动，抵达金垫时，若样品中含有病毒抗原，抗体1会识别并结合病毒抗原。样品继续向前流动，到达T线时，T线的抗体2也会结合病毒抗原。即形成“抗体1—病毒抗原—抗体2”的三明治结构，相当于病毒抗原作为“胶水”，把抗体1和抗体2粘在一起。大量的胶体金在此处固定，显示出红色条带，判断为阳性。如果样品中没有病毒抗原时，T线的抗体2无法抓住带有胶体金的抗体1，T线不显色，并判断为阴性。

C线显色的原理：

溶液会携带剩余的抗体1继续前行，来到C线处。无论抗体1是否携带病毒抗原，这里的抗体3可以结合抗体1。所以，抗体1会在C线处再次聚集，形成第二条红线。若C线出无红色条带，说明抗原检测板质量出现问题，检测结果不可信。

总结一下：如果溶液中含有病毒抗原，抗体1就会聚集在T线处，显示第一条红线；无论溶液中是否有病毒抗原，抗体1都会聚集在C线处，形成第二条红线，这就是“一条红线是阴性，两条红线是阳性”的原因。

抗原自测流程

抗原自测流程主要分为四个阶段：抗原自测前准备、样本采集、抗原检测和结果判读，具体操作见图5。

图5 抗原自测流程示意图（具体参照特定试剂盒说明书）^[2]

为什么会出现假阳性或假阴性？

前一段时间，掀起的“橙子新冠抗原检测阳性”的热度话题，其实也可以解释为橙子汁“污染”了试剂盒检测试剂。相关研究表明，要确保试剂盒正常运行，避免产生假阳性结果，必须满足试剂盒处理液的一定pH值、离子强度和缓冲容量。如果橙汁没有经过样本洗脱液，直接加到试剂盒上，就破坏了检测所需的适宜pH，造成抗原抗体的非特异性结果，产生了假阳性。出现假阳性或假阴性的原因可能有^[3]：

1.假阳性或假阴性的结果可能由于检测者自身，检测者所采集的鼻腔标本存在干扰物质。最常见的是检测者鼻腔内鼻涕较多，取样时鼻涕未擦拭干净，鼻涕中的酸性物质可能导致假阳性结果的发生。
2.检测操作过程也可能造成假阳性或假阴性结果。如果滴加的标本超过了规定的滴数有可能导致假阳性，尤其是一些灵敏度较高的试剂。
3.抗原检测试剂盒开封后要及时使用，如果放置时间过长，特别是在高温和高湿环境下，也会影响检测结果。同时，使用前要认真阅读使用说明，超时判读可能会导致假阳性的结果，过早判读可能会导致假阴性结果。
4.不同生产厂家的抗原检测试剂，选择的针对检测的新冠抗原的靶位也不尽相同，对于同一或者不同干扰物质呈现的反应也会出现不一致性。

结语

新冠抗原检测试剂盒属于侧向免疫层析的具体应用，免疫层析法的技术原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。简而言之，抗原检测试剂盒就是依据抗原和抗体的特异性结合来实现检测目的。

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参考文献：

［1］https://mp.weixin.qq.com/s/YVChY4yqn9n3QwlW7TJ37Q

［2］https://www.bjnews.com.cn/detail/164716370414826.html

［3］https://mp.weixin.qq.com/s/2U0AAV9q0gm5dPgeSWD-tw

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