菌种制备:大肠杆菌DH5、BL21、BL21(DE3)、BL21(DE3)PLySs的区别

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大肠杆菌DH5做克隆或保存质粒用,BL21用来做原核表达用。当然也有人用DH5a做表达也能表达出来。也有人用BL21保存质粒的,但时间久了,质粒容易丢失。你要是做原核表达的话,应该会现用前者克隆得到重组质粒,转化入后者进行表达

ØBL21是一种适合于外源蛋白表达的菌株,其内源性的蛋白酶基因缺失,

ØBL21(DE3),在B21的基础,整合了T7噬菌体基因组,适合T7表达系统;

ØBL21(DE3)PLySs,在BL21(DE3)基础,附带了T7溶菌酶基因,可以更为严谨控制T7聚合酶的表达。

(1)DH5a菌株

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。EcoliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的一半乳糖苷酶氨基端实现一互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型:F-,80dlacZΔM15,(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,-thi-1,gyrA96,relA1

(2)BL21(DE3)菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于入噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)

(3)BL21(DE3)pLysS 菌株

该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型:F-,ompThsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS,Camr

如果你的质粒是T7启动的(著名的pET表达系统)就应该用(DE3)的菌株,比如BL21(DE3),JM109(DE3),BL21中没有融合如T7噬菌体RNA聚合酶,所以不能能用于该类型的质粒表达,但是可以用于该类型质粒的克隆。BL21(DE3)plyss中附带一个小质粒,目的是使表达严谨。其表达作用同BL21(DE3)

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